化学学院何川贾桂芳课题组在Angew. Chem. Int. Ed.发文报道RNA修饰m6A单基因单碱基检测新技术

2018年10月，北京大学化学与分子工程学院何川/贾桂芳副研究员课题组在Angew. Chem. Int. Ed.（《德国应用化学》）杂志在线发表题为“An Elongation and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N⁶-methyladenosine Modifications”的研究论文(DOI:10.1002/anie.201807942)，报道了一种快捷检测RNA中N⁶-甲基腺嘌呤（N⁶-methyladenosine，m⁶A）的新方法。

表观转录组学（epitranscriptomics，又称“RNA表观遗传学”）是近年来鼓起的前沿科研领域。RNA化学修饰m⁶A作为表观转录组学中的明星修饰，是真核mRNA和非编码RNA中的重要化学修饰。m⁶A可以被修饰酶和去修饰酶进举措态可逆调节，并被结合蛋白识别调控RNA加工代谢，参与很多紧张生物学调节，如周期节律、干细胞分化、癌症发生发展及RNA病毒等。m⁶A检测对于其分子生物学功能和相干疾病研究特别很是紧张。目前报道的检测方法中只有SCARLET能够实现单mRNA和lncRNA中m⁶A单碱基分辨率的检测，但该方法操作复杂耗时，必要较大剂量的放射性同位素标记，难以广泛应用。

何川/贾桂芳课题组开发了SELECT方法（其原理如下图所示），该方法简单快捷，只需三小时就能够实现低丰度转录本中m⁶A单碱基分辨率的检测。该方法基于m⁶A修饰的两点特征：（i）能够阻碍DNA聚合酶在反转录过程的单碱基延长；（ii）能够降低缺口连接酶的连接服从。SELECT方法采用荧光定量PCR的方法进行定量，结合方法优化，其又发展了三个应用实例：（i）在生物学样本总RNA或总mRNA中检测mRNA或lncRNA上单位点是否含有m⁶A修饰；（ii）检测生物学样本中特定m⁶A位点的修饰比例；（iii）鉴定m⁶A甲基转移酶或去甲基酶的心理作用靶点。SELECT方法不仅简化了生物学样品中m⁶A修饰的检测过程，实现低丰度RNA中m⁶A单碱基分辨率的检测，还能够应用于其它RNA化学修饰的检测中，例如N1-甲基腺嘌呤（N¹-methyladenosine，m¹A）和2’-O-甲基化修饰（2’-O-methylation，Nm)等。

SELECT方法原理示意图

北京大学化学与分子工程学院2014级博士研究生肖雨为第一作者，贾桂芳为通信作者，相干工作得到国家科技部和国家天然科学基金委等经费资助。

编辑：麦洛

责编：凌薇