近期,北京大学化学与分子工程学院的何川/贾桂芳课题组在高等植物N6-甲基腺嘌呤(m6A)动态可逆调控的研究中取得紧张进展,相干工作以“ALKBH10B is An RNA N6-Methyladenosine Demethylase Affecting Arabidopsis Floral Transition”为题,发表在The Plant Cell (DOI: https://doi.org/10.1105/tpc.16.00912)。
N6-甲基腺嘌呤(m6A)是mRNA上最雄厚的修饰,遍布于真菌、动物以及植物当中。这一修饰调控了mRNA的剪接,出核转运、降解,以及翻译等过程,并深刻影响了干细胞状况维持和分化、癌症的发生与发展、动植物生殖与发育、病毒的侵染与扩增等过程。在哺乳动物中,N6-甲基腺嘌呤由甲基转移酶复合物(包括METTL3,METTL14,WTAP,KIAA1429,RBM15等)引入,由去甲基酶(FTO,ALKBH5)去除,由N6-甲基腺嘌呤结合蛋白识别并发挥功能。在高等植物中,人们对这一转录后修饰的细致研究重要集中于甲基转移酶复合物(MTA,MTB,FIP37,VIRILIZER,HAKAI等),然而,m6A在高等植物中是否是动态可逆的一向没有确切的结论。
北京大学化学学院何川/贾桂芳课题组充分行使其在m6A去甲基酶领域的研究经验,对这一悬而未决的题目进行了开创性的探索。通过序列比对,该课题组找到了拟南芥中N6-甲基腺嘌呤修饰潜在的去甲基酶,并偏重研究了ALKBH10B的去甲基功能及其在拟南芥生命运动中的调控作用。首先,体外表达纯化的ALKBH10B蛋白对单链短RNA和全长的拟南芥mRNA都有显明的m6A去甲基活性。通过比较野生型Col-0,ALKBH10B的T-DNA插入突变体,突变体回补和无活性回补株系,以及ALKBH10B过表达株系mRNA中m6A的含量,注解ALKBH10B的去甲基功能影响了拟南芥mRNA的m6A水平。ALKBH10B缺失导致明显的晚花表型,且与去甲基酶活性相干。在ALKBH10B的T-DNA插入突变体中,FT基因mRNA的甲基化水平升高,而响应地,其mRNA稳固性也较野生型Col-0更低,最终导致FT的mRNA水平在突变体中明显低于野生型。同样,FT上游的SPL3和SPL9也在突变体中有更高的mRNA甲基化水平、更快的mRNA降解和更低的mRNA水平。由此确证ALKBH10B通过影响FT,SPL3和SPL9影响拟南芥的成花诱导。此外,研究人员分别对野生型和ALKBH10B突变体进行了RNA-seq和m6A-IP-seq。测序效果注解,ALKBH10B广泛影响了拟南芥mRNA的甲基化谱。相比野生型,在突变体中含高甲基化的基因进行功能解释表现,ALKBH10B缺失影响的基因功能与所观察到的alkbh10b-1突变体表型相符合。
何川/贾桂芳课题组博士研究生段洪超为文章第一作者,贾桂芳和何川为共同通信作者。此项研究得到了国家天然科学基金委和科技部的资助。
论文链接:http://www.plantcell.org/content/29/12/2995
拟南芥m6A去甲基酶ALKBH10B (A. ALKBH10B体外去甲基酶活验证,B. ALKBH10B体内去甲基酶活验证;C. ALKBH10B突变体具有晚花表型;D. ALKBH10B调控开花机理)。
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